尿酸是嘌呤核苷酸代謝的終產(chǎn)物,主要經(jīng)腎排泄。血尿酸經(jīng)腎小球?yàn)V過后,絕大部分(90%以上)被近端小管重吸收。因此尿酸的腎清除率很低,血清尿酸(serum uric acid,SUA)濃度增高的原因之一是由于腎排出尿酸減少所致。尿酸的溶解度很低,當(dāng)血尿酸濃度超過參考區(qū)間時(shí),可沉積于關(guān)節(jié)、軟骨、軟組織和腎等處,形成反復(fù)發(fā)作的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎,或在泌尿道沉淀形成結(jié)石。

血尿酸的測定方法主要有磷鎢酸還原法和尿酸氧化酶法。磷鎢酸還原法是將樣本制成無蛋白濾液,具有還原性的尿酸在堿性環(huán)境中使磷鎢酸還原成藍(lán)色的鎢藍(lán),在660nm處比色測定。此法特異性不高,靈敏度低,顯色不穩(wěn)定。目前血清尿酸的測定方法主要是尿酸氧化酶法。高效液相層析法測定尿酸,快速、靈敏、特異,可作為參考方法。

尿酸氧化酶偶聯(lián)比色法

【原理】 尿酸在尿酸氧化酶氧化下,生成尿囊素和H 2 O 2,后者與2-羥-3,5二氯-苯磺酸(DHBS)和4-AAP,在過氧化物酶(POD)催化下,縮合成紅色的醌亞胺化合物(Trinder反應(yīng)),其顏色的深淺與尿酸的濃度成正比。反應(yīng)式如下

尿酸+O2+H 2 O?尿囊素+CO2+H 2 O2

2H 2 O 2+4-氨基安替比林+3,5-二氯-2-強(qiáng)苯磺酸?醌亞胺化合物+H 2 O

【器材與試劑】

1.器材 試管、加樣器、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)。

2.試劑 (市售試劑盒)

(1)酶混合試劑:尿酸氧化酶>120U/L;POD>1 000 U/L;4-AAP 0.5mmol/L;DHBS 4mmol/L;磷酸鹽緩沖液100mmol/L。

(2)300μmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液。

【操作】 按表10-5操作。

表10-5　尿酸氧化酶偶聯(lián)比色法測定血清尿酸的操作步驟

混勻,置室溫20min,在520nm處,用空白管調(diào)零,讀取各管吸光度。

【計(jì)算】

【參考區(qū)間】 男性:149~416μmol/L;女性:89~357μmol/L。

【質(zhì)量保證】

1.紅細(xì)胞內(nèi)含有多種非特異性還原物質(zhì),因此宜用血清或血漿作樣本。

2.血清樣本室溫條件下可穩(wěn)定3d。

3.血尿酸含量>713.8μmol/L時(shí),用生理鹽水稀釋后測定,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

【應(yīng)用評(píng)價(jià)】

1.特異性 尿酸氧化酶催化尿酸的特異性高,過氧化物酶催化反應(yīng)的特異性較差,維生素C和膽紅素對(duì)尿酸測定存在負(fù)干擾。

2.回收率 94.6%~102.3%。

3.線性范圍 178.6~713.8μmol/L。

4.變異系數(shù) 在224.8~792.8μmol/L范圍內(nèi),批內(nèi)、批間CV<5%。

【臨床意義】 尿酸是體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物,大部分尿酸經(jīng)腎隨尿液排出體外。

1.腎功能減退時(shí),腎小球?yàn)V過減少或腎小管排泄尿酸減少,血清尿酸增高。

2.血清尿酸測定對(duì)痛風(fēng)診斷很有幫助,痛風(fēng)患者血清尿酸可達(dá)800~1500μmol/L。

3.在核酸代謝增加,如白血病、多發(fā)性骨髓瘤等,尿酸產(chǎn)生過多,使血清尿酸增高。

4.慢性酒精中毒、妊娠高血壓綜合征,由于腎排泄尿酸減少,血清尿酸增高。