(一)血、尿糖皮質(zhì)激素及其代謝產(chǎn)物測定

血皮質(zhì)醇濃度可直接反映腎上腺糖皮質(zhì)激素的分泌水平,尿皮質(zhì)醇來源于血液中游離型經(jīng)腎小球的濾過,可反映血液中有生物活性的糖皮質(zhì)激素水平。

皮質(zhì)醇測定方法有RIA法、CLIA法、ECLIA法和HPLC等。

1.RIA法 快速、簡便、靈敏,有商品試劑盒,是目前常用的方法之一。血皮質(zhì)醇檢測總的皮質(zhì)醇,包括血漿結(jié)合型和游離型皮質(zhì)醇,不能排除CBG的影響。健康人皮質(zhì)醇的分泌存在晝夜節(jié)律,其消失是皮質(zhì)醇增多癥的診斷依據(jù)之一。

24h尿皮質(zhì)醇測定不受晝夜節(jié)律的影響,能可靠地反映皮質(zhì)醇濃度。

參考區(qū)間:血漿(清)皮質(zhì)醇138~635nmol/L(8~10AM);83~359nmol/L(4~6PM) (RIA法)。24h尿皮質(zhì)醇,成年人55~276nmol/24h尿(RIA法)。

2.CLIA法

(1)原理:在反應(yīng)體系中,待測抗原(F)與過量的堿性磷酸酶標(biāo)記抗原(ALP-F)競爭性結(jié)合特異性抗F抗體(Ab)結(jié)合位點(diǎn),即樣品中F和ALP-F與Ab進(jìn)行競爭性結(jié)合反應(yīng),由于ALP-F和Ab是定量的,樣品中F的含量越多,ALP-F-Ab的量就越少。當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí),光子的產(chǎn)出量與ALP-F-Ab的量成正比,而與F的含量成反比。

(2)試劑:市場上有商品試劑盒。

(3)參考區(qū)間:血漿(清)皮質(zhì)醇:0.17~0.44μmol/L(8AM);0.06~0.25μmol/L(4PM)。

(4)臨床意義:血皮質(zhì)醇濃度增高主要見于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、腎上腺腫瘤、應(yīng)激、妊娠、口服避孕藥、長期服用糖皮質(zhì)激素等;降低主要見于腎上腺皮質(zhì)功能減退、格雷夫斯病、垂體功能減退等。

(二)類固醇激素及其代謝產(chǎn)物測定

1.尿17-酮類固醇測定 類固醇激素及其代謝產(chǎn)物中,凡在C17上沒有側(cè)鏈而僅有一個(gè)酮基者,稱為17-酮類固醇(17-ketosteroid,17-KS),包括睪丸和腎上腺產(chǎn)生的雄性激素(不包括睪酮)及其代謝產(chǎn)物。少量的皮質(zhì)醇可在C17發(fā)生羥基的脫氫、氧化生成17-KS。成年男性1/3的17-KS來自睪丸,2/3來自腎上腺皮質(zhì);女性17-KS幾乎全部來自腎上腺皮質(zhì)。臨床測定的17-KS包括雄酮、異雄酮、脫氫異雄酮及代謝物。

常規(guī)17-KS測定采用Zimmermann比色法。

(1)原理:尿中17-KS多以與葡萄糖醛酸酯或硫酸酯的結(jié)合形式存在,取24h尿標(biāo)本加酸水解,釋放游離的17-KS。提取后,在堿性介質(zhì)中17-KS中的酮-亞甲基(—CO—CPH 2—)與間-二硝基苯作用,生成紫紅色化合物,于520nm處比色測定。

(2)參考區(qū)間:男性,28.5~61.8μmol/24h尿;女性,20.8~52.1μmol/24h尿。

(3)質(zhì)量保證:尿液用濃鹽酸(5ml)防腐。測定前停服中藥和四環(huán)素、維生素B2等含色素的藥物。某些降壓藥、地西泮等也影響測定結(jié)果。該法精密度較好,但靈敏度不夠,操作較費(fèi)時(shí)。

(4)臨床意義:尿17-KS水平主要反映睪丸和腎上腺皮質(zhì)的分泌功能。增高見于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、垂體前葉功能亢進(jìn)、睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤、甲狀腺功能亢進(jìn)及應(yīng)用ACTH、雄性激素和皮質(zhì)激素等。減低見于腎上腺皮質(zhì)功能減退、腺垂體功能減退、睪丸功能減退及甲狀腺功能減退等。

2.尿17-羥皮質(zhì)類固醇測定 尿17-羥皮質(zhì)類固醇(17-hydroxycorticosteroids,17-OHCS)包括尿中所有C17上有羥基的類固醇物質(zhì),主要是腎上腺皮質(zhì)分泌的糖皮質(zhì)激素及其代謝產(chǎn)物,包括皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、17-羥黃體酮、11-脫氧皮質(zhì)醇等。由于糖皮質(zhì)激素的分泌具有明顯的晝夜節(jié)律性,通常檢測24h尿17-OHCS,尿中80%的17-OHCS來自皮質(zhì)醇,因此17-OHCS濃度可反映血中皮質(zhì)醇含量。

17-OHCS測定多采用傳統(tǒng)的Porter-Silber比色法。

(1)原理:將尿酸化,使結(jié)合型17-OHCS轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x型,以氯仿(正丁醇-氯仿)抽提后,在鹽酸溶液中與苯肼反應(yīng)生成黃色的苯腙,在410nm處比色測定。

(2)質(zhì)量保證:留樣前應(yīng)停用中草藥、四環(huán)素和維生素B2等藥物,以防干擾。尿樣收集器內(nèi)放5~10ml濃鹽酸防腐。應(yīng)激狀態(tài)、營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病、肝硬化、腎功能不全,以及多種藥物(如潑尼松、地塞米松等)和食物可干擾試驗(yàn),應(yīng)予以注意。本法所需條件簡單,但特異性較差。

(3)參考區(qū)間:男性,(27.88±6.6)μmol/24h尿;女性,(23.74±4.47)μmol/24h尿。

(4)臨床意義:17-OHCS主要反映腎上腺皮質(zhì)分泌功能。腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn),如庫欣病、腎上腺皮質(zhì)瘤等17-OHCS增高;甲狀腺功能亢進(jìn)、應(yīng)激、肥胖病、胰腺炎等也增高。17-OHCS降減見于腎上腺皮質(zhì)功能減退、垂體前葉功能減退、腎上腺切除術(shù)后及甲狀腺功能減退等。凡腎上腺皮質(zhì)功能正常者,服藥日24h尿17-OHCS排泄量由服藥前的基數(shù)值降至50%以下,血漿皮質(zhì)醇<140nmol/L。如腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)不被抑制,服藥后2d 24h尿17-OHCS濃度可用于觀察抑制的恢復(fù)情況抑或有延遲反應(yīng)存在。

(三)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能檢測

下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能檢測及必要的動(dòng)態(tài)功能試驗(yàn),有助于腎上腺皮質(zhì)功能紊亂的病變部位及性質(zhì)確定。

1.血漿ACTH測定 ACTH是腺垂體分泌的微量多肽激素。正常ACTH分泌存在與皮質(zhì)醇相同的晝夜節(jié)律,在腎上腺皮質(zhì)功能紊亂時(shí),ACTH的分泌節(jié)律大多消失。血漿ACTH測定多采用48h小劑量地塞米松抑制試驗(yàn)或ACTH興奮試驗(yàn)。

(1)原理:收集24h尿2d,測定17-OHCS濃度,取兩數(shù)之均值作為基礎(chǔ)對照,第3日開始口服地塞米松0.5mg/6h,連續(xù)2d,分別收集2d的24h尿,測定尿17-OHCS含量。也可于服藥前清晨8時(shí)及服后24h、48h取血,測定血漿皮質(zhì)醇濃度。

(2)參考區(qū)間:早8時(shí)<26pmol/L,午夜10時(shí)<2.2pmol/L(RIA法)。

(3)質(zhì)量保證:長時(shí)間服用有肝酶誘導(dǎo)作用的藥物,如苯妥英鈉、苯巴比妥、利福平等,可加速地塞米松的代謝滅活,產(chǎn)生假陰性。近期較長時(shí)間使用糖皮質(zhì)激素類藥物者,不宜進(jìn)行本試驗(yàn)。機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)也干擾試驗(yàn)。

(4)臨床意義:先天性腎上腺皮質(zhì)增多癥、下丘腦及垂體性皮質(zhì)醇增多癥患者,午夜ACTH明顯增多,晝夜節(jié)律消失;繼發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥、原發(fā)性皮質(zhì)醇增多癥患者,早8時(shí)血漿ACTH明顯降低,晝夜節(jié)律消失。

2.地塞米松(dexamethasone,DMT)抑制試驗(yàn) 地塞米松是人工合成的強(qiáng)效糖皮質(zhì)激素類藥物,對下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸有強(qiáng)烈的皮質(zhì)醇樣抑制作用,主要抑制腺垂體釋放ACTH,進(jìn)而抑制腎上腺皮質(zhì)激素的合成與釋放,用于判斷病變部位。

3.ACTH興奮試驗(yàn) ACTH可刺激腎上腺皮質(zhì)合成、釋放皮質(zhì)醇。用0.25mg合成的ACTH肌內(nèi)或靜脈注射,分別于注射前和注射后0.5h、1h采血,測定血漿皮質(zhì)醇濃度變化。健康人注射ACTH后,峰值在0.5h出現(xiàn),血皮質(zhì)醇較注射前的基礎(chǔ)值至少增加157nmol/L (7μg/dl)以上。艾迪生病患者皮質(zhì)醇基礎(chǔ)值低,對ACTH刺激無反應(yīng);繼發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能低下者,基礎(chǔ)值也低,但對ACTH有延遲反應(yīng);腎上腺腫瘤皮質(zhì)醇基礎(chǔ)值升高,但對ACTH刺激多無反應(yīng);下丘腦-垂體性皮質(zhì)醇增多癥可出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng)。