1．檢驗?zāi)康?/p>

規(guī)范總膽紅素（TBIL）檢測試驗，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

2．檢驗原理

測定方法：定時終點重氮法

在此反應(yīng)中，膽紅素與重氮試劑在作為加速劑的咖啡因、苯甲酸甲酯和乙酸存在下發(fā)生反應(yīng)，生成偶氮膽紅素。

系統(tǒng)將按比例自動把適量體積的樣品和試劑分配到一個反應(yīng)杯中。所用的樣品對試劑比例為1比35。系統(tǒng)將監(jiān)測520 nm的光吸收變化。此光吸收變化與樣品中的TBIL濃度成正比，系統(tǒng)依此計算并給出TBIL濃度。

3．設(shè)備性能參數(shù)

各種生化分析儀性能指標(biāo)見相應(yīng)生化分析儀說明書。

4．標(biāo)本

詳見生化組標(biāo)本的采集與處理程序。

5．設(shè)備和試劑

5.1 設(shè)備Beckman公司生產(chǎn)UniCel? DxC800、LX-20生化分析儀。

5.2 試劑

5.2.1 來源：Beckman系統(tǒng)配套試劑

5.2.2 儲存條件及穩(wěn)定性：

5.2.2.1 未開瓶于室溫儲存的TBIL試劑，儲存期可至試劑標(biāo)簽上標(biāo)明的儲存期限。

5.2.2.2 配制之后，本試劑可在其有效期內(nèi)2～8℃保持穩(wěn)定30 d。不可冷凍。

5.2.3 準(zhǔn)備

5.2.3.1 P/N 442745試劑（300次檢測）：將最小隔室（C）的內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移100μL（0.1 ml）到中間隔室（B）。

5.2.3.2 P/N 476861試劑（400次檢測）：將最小隔室（C）的內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移200μL（0.2 ml）到中間隔室（B）。

5.2.3.3 重新蓋好試劑蓋子、輕輕倒轉(zhuǎn)幾次以充分混勻。必須徹底混勻才能成功地進(jìn)行校準(zhǔn)。

6．容器及試劑添加劑

血液標(biāo)本采集的容器是：肝素鋰抗凝或不抗凝的真空采血管。

添加劑是：肝素鋰或不含任何添加劑。

7．校準(zhǔn)

7.1 校準(zhǔn)物

7.1.1 來源

7.1.2 儲存及穩(wěn)定性：

7.1.2.1 未開瓶的校正劑+2℃至+8℃儲存，至試劑瓶上印刷的失效日期。

7.1.2.2開瓶后，重新封口的校正劑可在其有效期內(nèi)+2℃至+8℃保持穩(wěn)定24 h。

7.1.3 準(zhǔn)備：無需配制，校準(zhǔn)劑從冰箱中取出后恢復(fù)至室溫后才能進(jìn)行校準(zhǔn)。

7.2 量值溯源：見UniCel? DxC800、LX-20生化分析儀使用說明書。

7.3 校準(zhǔn)周期：不同批號或超過定標(biāo)時間需定標(biāo)。

8．操作步驟

8.1 標(biāo)本接收及編號

8.1.1 標(biāo)本接收

有條碼標(biāo)本：打開檢驗信息管理系統(tǒng)→標(biāo)本接收系統(tǒng)（條碼）→接收標(biāo)本→存入。

無條碼標(biāo)本：整理標(biāo)本，審核合格后，對檢驗申請單或標(biāo)本進(jìn)行編號（具體操作詳見《標(biāo)本接收工作程序》。

8.1.2 標(biāo)本編號　編號總原則如下。

肝功全套檢測：1-300號；

腎功、生化、葡萄糖檢測：301-500號；

急診檢測：501-600號；

夜班或節(jié)假日、周末下午檢測：601-700號；

尿液標(biāo)本檢測：701-800號；

體檢樣本：1001-2000號。

8.2 標(biāo)本登記或錄入

8.2.1 有條碼標(biāo)本排樣：打開檢驗信息管理系統(tǒng)→標(biāo)本排樣系統(tǒng)（條碼）→選擇儀器→輸入樣本號→掃描條碼號→將樣本號標(biāo)記于試管上→存入。

8.2.2 無條碼標(biāo)本排樣：打開檢驗信息管理系統(tǒng)→資料錄入→選擇儀器→輸入樣本編號→錄入患者相關(guān)信息（如患者ID號，已繳費的輸入患者ID號的可調(diào)取病人信息，無ID號的則手工錄入病人姓名、性別、年齡、診室等）→錄入采樣時間及收到標(biāo)本時間→存入。

8.3 上機操作　UniCel? DxC800生化分析儀24 h待機，簡要操作如下。

8.3.1工作前檢查：檢查儀器、水、電、試劑等。

8.3.2 對需要校準(zhǔn)的項目進(jìn)行校準(zhǔn)。

8.3.3 檢測Beckman原裝高、中、低三水平質(zhì)控。

8.3.4 對已排樣無條碼樣本進(jìn)行編程　進(jìn)入Samples屏幕→輸入架號﹑杯號及樣本號→選擇標(biāo)本類別→選擇項目→點擊F10保存。

8.3.5 樣本裝載

8.3.5.1 將分離完成并已編程結(jié)束的樣本按程序分配順序插入樣本檢測架。

8.3.5.2 將分離完成已排樣有條碼的樣本可隨機插入樣本檢測架。

8.3.6 運行：將已完成裝載的檢測架放入樣本檢測軌道并按RUN鍵，儀器開始運行。急診條碼儀器自動識別，或者急診樣本手工編程時選中“stat”，及時進(jìn)樣。

8.4 檢驗結(jié)果的錄入

8.4.1 儀器一般自動將檢驗結(jié)果傳入檢驗信息管理系統(tǒng)。

8.4.2 部分意外不能傳入檢驗信息系統(tǒng)者，可在進(jìn)入主屏后，點擊Results，輸入樣本號/架號，點擊Enter，點擊Host 即可。

8.4.3 部分在其他儀器檢測結(jié)果需錄入者：進(jìn)入檢驗信息管理系統(tǒng)→資料錄入→錄審結(jié)果→選擇需錄入的項目名稱→錄入結(jié)果→存入。

8.4.4 部分檢測項目復(fù)查后需修改結(jié)果者：進(jìn)入檢驗信息管理系統(tǒng)→資料錄入→錄審結(jié)果→選擇需修改的項目名稱→錄入結(jié)果→填寫修改原因→存入。

注：檢驗信息管理系統(tǒng)詳細(xì)操作見《檢驗信息管理系統(tǒng)操作程序》。

8.5 檢驗報告的審核　實驗室主管核對項目、分析檢驗結(jié)果，根據(jù)復(fù)檢程序，提出復(fù)檢要求，確認(rèn)無誤后網(wǎng)絡(luò)審核發(fā)送、打印檢驗報告，授權(quán)簽字人簽字蓋章即可發(fā)出報告。

注：儀器詳細(xì)操作程序、校準(zhǔn)程序見《Beckman DxC800操作規(guī)程》、《Beckman LX-20操作規(guī)程》和《Beckman DxC800系統(tǒng)校準(zhǔn)方法》、《Beckman LX-20系統(tǒng)校準(zhǔn)方法》。

9．質(zhì)量控制

9.1 質(zhì)控品：廠家提供的Beckman原裝高、中、低三水平質(zhì)控物，不需復(fù)溶，直接使用。

9.2 控制參數(shù)：TBIL

9.3 周期：24 h

9.4 質(zhì)控物準(zhǔn)備　從2～8℃冰箱取出質(zhì)控物，將已混勻的質(zhì)控物加入反應(yīng)杯中，恢復(fù)室溫15 min。

9.5 質(zhì)控物的檢測

9.5.1 每天早上將Beckman原裝高、中、低三水平質(zhì)控物按《各儀器標(biāo)準(zhǔn)操作程序》常規(guī)操作方法對儀器進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量監(jiān)控，質(zhì)控結(jié)果在允許范圍內(nèi)可進(jìn)行樣本分析。

9.5.2 在每次進(jìn)行新的校正時，以及按適用的系統(tǒng)手冊中的規(guī)定進(jìn)行特別保養(yǎng)或故障排除后，都要進(jìn)行質(zhì)控監(jiān)測，質(zhì)控結(jié)果在允許范圍內(nèi)可投入使用。

9.5.3 每使用新批號試劑時，需監(jiān)測質(zhì)控情況，并用前一批號試劑測試過的標(biāo)本隨機選擇5個標(biāo)本上機檢測，將兩次結(jié)果對比分析，偏差需小于該參數(shù)1/3CLIA’88要求。

9.5.4 將每日質(zhì)控情況記錄于《儀器使用登記表》。

9.6 質(zhì)控規(guī)則、結(jié)果分析及失控處理見《室內(nèi)質(zhì)量控制程序》。

9.7 室間質(zhì)控　每年參加重慶市、衛(wèi)生部臨床檢驗中心及CAP室間質(zhì)控。

10．干擾因素及變異的潛在來源

10.1 溶血、脂血對結(jié)果有一定影響。

10.2 疊氮化物、枸櫞酸鹽、龍膽酸、草酸鹽、乙酰乙酸對結(jié)果有一定影響。10.3 標(biāo)本、反應(yīng)液中的顆粒微粒、微小團塊可影響結(jié)果分析。

11．結(jié)果計算及不確定度

11.1 計算公式結(jié)果=U×C/S

U：測定管光密度，C：標(biāo)準(zhǔn)管濃度（單位：μmol/L），S：標(biāo)準(zhǔn)管光密度

之后儀器自動計算結(jié)果。

11.2 計量單位：μmol/L。

11.3 測量不確定度（表11-14）

表11-14　測量不確定度

12．生物參考區(qū)間

血清或血漿：1.7～23.0μmol/L。

13．患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間

血清或血漿：1.7～513.0μmol/L。

14．警告/危急值

14.1 產(chǎn)科、創(chuàng)傷科：血總膽紅素≥40μmol/L，立即聯(lián)系臨床醫(yī)師并作好記錄。

14.2 新生兒：血總膽紅素≥300μmol/L，立即聯(lián)系臨床醫(yī)師并作好記錄。

15．實驗室解釋

膽紅素測定數(shù)據(jù)用于診斷和治療肝臟疾病、溶血性疾病、血液和代謝疾病，包括肝炎和膽囊阻塞。

15.1 血清總膽紅素增高,見于病毒性肝炎、中毒性肝炎或肝癌、肝內(nèi)或肝外膽道阻塞、溶血性疾病、新生兒生理性黃疸、Crigler-Najjar綜合征、Gilbert病和Dubin-Johnson綜合征等。

15.2 血清結(jié)合膽紅素增高,見于肝內(nèi)或肝外膽道阻塞、肝細(xì)胞損害（特別是疾病后期）、Dubin-Johnson綜合征和Rotor綜合征。

16．安全防護措施

16.1 標(biāo)本的運輸必須保證運送過程的生物安全，防止溢出。標(biāo)本溢出后，應(yīng)該立即對污染的環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行消毒處理。

16.2 對標(biāo)明有傳染性疾病的血液標(biāo)本應(yīng)特別防護，以不污染環(huán)境和保護工作安全為前提。

16.3 在進(jìn)行檢測分析過程中的一切操作活動中，必須遵守相關(guān)安全規(guī)則。執(zhí)行必要的防范措施，比如佩戴防護性手套、口罩等。

16.4 血液標(biāo)本在離心過程中，應(yīng)將所有標(biāo)本加蓋。離心后，開啟試管蓋時應(yīng)防止氣霧膠污染環(huán)境。

16.5 與標(biāo)本接觸的一切器皿、儀器組件/拆卸組合零件都應(yīng)視為污染物，因此操作人員不小心接觸了這種污染源時，應(yīng)立即用清水沖洗被污染區(qū)域并采取必要醫(yī)療措施。

16.6 如果操作人員的皮膚或衣物上沾到了標(biāo)本或廢液，應(yīng)立即用清水沖洗并進(jìn)行消毒處理。如果眼睛中濺入標(biāo)本或廢液，用大量的清水沖洗并采取必要的醫(yī)療措施。

16.7 在測試樣本時，儀器蓋子需蓋好。

16.8 所有檢查過的樣本及有關(guān)的廢棄物，都會給您帶來潛在的危險或生物污染。所有廢棄樣本及廢棄物的處理方法同標(biāo)本的處理程序。

17．注意事項

17.1 對于濃度超過分析范圍上限的樣品，通常用生理鹽水稀釋2倍后重新分析，并將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，以稀釋后檢測結(jié)果落在線性范圍內(nèi)為最終稀釋倍數(shù)，稀釋倍數(shù)可在樣品編程時將其輸入檢測系統(tǒng)。

17.2 檢測結(jié)果的復(fù)檢，詳見《生化組相關(guān)復(fù)檢程序》。

18．參考文獻(xiàn)

[1] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規(guī)程．3版．南京：東南大學(xué)

出版社，2007．[2] 《Beckman DxC800操作說明書》．[3] 《Beckman LX-20操作說明書》．