抑菌環(huán)試驗通過抑菌環(huán)大小判斷抗菌藥物（包括消毒產(chǎn)品）是否具有抑菌能力的試驗。抑菌環(huán)試驗是利用含抑菌劑的試驗紙片不斷溶解并能在瓊脂培養(yǎng)液中擴散，在抑菌劑擴散范圍內(nèi)細菌不能生長而顯示出無菌生長帶的原理，然后精確量取無菌生長帶的直徑來判斷抑菌環(huán)大小，確定抑菌效果。多用于對溶出性抑菌劑和含有溶出性抑菌劑產(chǎn)品，包括抗菌布、抗菌肥皂等的鑒定。

【試驗準備】

1.試驗菌種　金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（ATCC　8099）、白色念珠菌（ATCC　10231）或根據(jù)抑菌劑特性選用其他細菌制成菌懸液。

2.制備抑菌片　取直徑5mm的圓形的新華一號定性濾紙片，經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理后，置120℃烤干2h，每4片一疊，滴加實際使用濃度的抑菌劑溶液20ml。將濾紙片分開，平放于清潔的無菌平皿內(nèi)，開蓋置溫箱（37℃）烘干或置室溫下自然干燥，備用。對含可溶出性抗菌產(chǎn)品，直接制成直徑5mm的圓片（塊），每4片一組。

3.制備陰性對照樣片　取無菌干燥濾紙片，每疊4片，滴加無菌蒸餾水20ml，烘干后備用。溶出性抗菌產(chǎn)品的陰性對照樣本，應(yīng)取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣品，制成與試驗組大小相同的樣片（塊）。

4.培養(yǎng)液的準備　營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)液，真菌用沙堡瓊脂培養(yǎng)液。

5.試驗器具　微量移液器（5～50ml，可調(diào)式），游標卡尺，活菌培養(yǎng)計數(shù)所需器材。

【操作步驟】

1.接種試驗菌　用無菌棉拭子蘸取濃度為5×105～5×106cfu／ml的試驗菌液，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)液平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周（達到近融合生長）。蓋好平皿，置室溫干燥5min。

2.貼放抑菌片　用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面。各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上，貼放好后，用無菌鑷子輕壓菌片，使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，置37℃溫箱，培養(yǎng)16～18h，觀察結(jié)果。每次試驗，貼放1個染菌平板，每個平板貼放4片試驗菌片，1片陰性對照樣片，共5片。

3.測量抑菌環(huán)　用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑（包括貼片）并記錄。測量抑菌環(huán)時，應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進行。測量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。試驗要重復(fù)3次。

【結(jié)果判斷】

抑菌環(huán)直徑＞7mm者、陰性對照組應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生判為有抑菌作用，3次重復(fù)試驗均達有抑菌作用者，判為合格；抑菌環(huán)直徑≤7mm者，判為無抑菌作用。陰性對照若顯示出抑菌環(huán)，則試驗無效。

【注意事項】

（1）每次試驗均應(yīng)設(shè)陰性對照，不可省略，在報道中應(yīng)列出對照組的結(jié)果。

（2）接種用細菌懸液的濃度應(yīng)符合要求。應(yīng)按本書第23章第二節(jié)細菌繁殖體懸液的配制方法進行。濃度過低或過高、接種菌量過少或過多，都會直接影響抑菌環(huán)大小而導(dǎo)致結(jié)果不準確。

（3）應(yīng)保持瓊脂濃度的準確性，否則也可影響抑菌環(huán)的大小。

（4）培養(yǎng)時間不得超過18h，培養(yǎng)過久，部分細菌可恢復(fù)生長，抑菌環(huán)變小。

（5）抑菌環(huán)直徑可受抑菌劑藥量、藥效和干濕度影響，因此，抑菌劑濾紙片應(yīng)在試驗當(dāng)天制備。