（一）血清鐵蛋白測定

血清鐵蛋白測定（measurement of serum ferritin，SF）多采用放射免疫分析法、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法，現(xiàn)介紹電化學(xué)發(fā)光免疫分析法。

【原理】一定量生物素化抗鐵蛋白單克隆抗體（一抗）和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗鐵蛋白單克隆抗體（二抗），加入待檢血清，血清中的鐵蛋白與雙抗體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，使與鏈霉親合素包被的磁性微粒結(jié)合，結(jié)合的磁性微粒被工作電極下的磁鐵吸附于電極表面，未結(jié)合的游離物均被洗棄，檢測電極通電產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，產(chǎn)生的光子強(qiáng)度與抗原抗體復(fù)合物的量呈線性關(guān)系，儀器自動從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出檢測結(jié)果。

【試劑】商品試劑盒

1.標(biāo)準(zhǔn)抗體。

2.生物素化抗鐵蛋白單克隆抗體。

3.三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗鐵蛋白單克隆抗體。

4.含三丙胺的緩沖液。

5.維生素C 2.52mol/L。

6.鏈霉親合素包被的磁性微粒。

【操作】

1.采患者空腹靜脈血，制備血清。

2.在全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上進(jìn)行測定，包括加樣、分離、攪拌、溫育、測定、計算結(jié)果、打印報告等整個操作過程嚴(yán)格按儀器操作規(guī)程進(jìn)行。

【注意事項】

1.避免標(biāo)本溶血，因較重的溶血可使結(jié)果偏高。

2.試劑中含疊氮鈉防腐劑，不可入口，避免接觸皮膚及黏膜。

【參考值】男性15～200μg/L，女性12～150μg/L。

【臨床意義】

1.降低　常見于缺鐵性貧血早期、失血、慢性貧血和營養(yǎng)缺乏等。

2.增高　見于鐵粒幼細(xì)胞貧血、肝疾病、血色病、過量輸血、急性感染、惡性腫瘤等。

（二）血清轉(zhuǎn)鐵蛋白測定

血清轉(zhuǎn)鐵蛋白測定（measurement of serum transferrin，Tf）常用的測定方法有免疫散射比濁法、免疫透射比濁法、放射免疫法和電泳免疫擴(kuò)散法等。

【原理】免疫散射比濁法：利用抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體與血清中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，其散射光的強(qiáng)度與抗原抗體復(fù)合物的濁度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，即可計算出轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度。

【試劑】商品試劑盒

1.轉(zhuǎn)鐵蛋白膠乳試劑　包括試劑1（緩沖液）和試劑2（羊抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白血清）

2.轉(zhuǎn)鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)液

【操作】

1.取試管8只，標(biāo)明標(biāo)準(zhǔn)管6支、空白管1只、測定管1只。6只標(biāo)準(zhǔn)管的濃度分別為0g/L、0.46g/L、0.93g/L、1.84g/L、3.69g/L、7.00g/L，按表6-1操作。

2.各管混勻，37℃10min。

3.在免疫散射比濁儀波長570nm處比色測定散射光強(qiáng)度。

4.測定管與標(biāo)準(zhǔn)管散射光強(qiáng)度減去空白管散射光強(qiáng)度，以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，以散射光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可得出檢測血清轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度。

表6-1　血清轉(zhuǎn)鐵蛋白測定的操作步驟

若在全自動生化分析上測定可按儀器說明書和試劑盒的操作方法進(jìn)行操作。

【注意事項】

1.要用血清或肝素、EDTA鹽抗凝血漿檢測，標(biāo)本不可反復(fù)凍融，不能被污染。

2.試劑中含疊氮鈉防腐劑，不可入口，避免接觸皮膚及黏膜。

【參考值】2.0～3.6g/L。

【臨床意義】

1.轉(zhuǎn)鐵蛋白增高　見于缺鐵性貧血、慢性失血和妊娠。

2.轉(zhuǎn)鐵蛋白降低　見于急性白血病、腎病綜合征、肝硬化、惡性腫瘤、炎癥等。

（三）血清鐵測定（略，見《生物化學(xué)檢驗技術(shù)》）

（四）血清總鐵結(jié)合力測定

血清總鐵結(jié)合力（total iron binding capacity，TIBC）是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白全部與鐵結(jié)合后鐵的總量，可反映血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白的水平。

【原理】血清中加入已知過量的鐵標(biāo)準(zhǔn)液，使血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白與鐵結(jié)合達(dá)到飽和，再用吸附劑（輕質(zhì)碳酸鎂）除去多余的鐵，以測定血清鐵的方法測定鐵的含量，即為總鐵結(jié)合力。總鐵結(jié)合力減去血清鐵即為未飽和鐵結(jié)合力（UIBC）。血清鐵與血清總鐵結(jié)合力的百分比稱為轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度（transferrin saturation，TS）。

【試劑】

1.鐵標(biāo)準(zhǔn)液（17.91μmol/L） 取鐵標(biāo)準(zhǔn)液（1.791mmol/L）1ml，用雙蒸餾水稀釋至100ml。

2.碳酸鎂[MgCO3]4Mg（OH）2·5H2O。

3.0.5mol/L醋酸緩沖液　0.5mol/L醋酸液150ml加0.5mol/L醋酸鈉液350ml混勻，調(diào)至pH為5.0。

4.顯色劑　2，2′-聯(lián)吡啶0.375g，羥胺鹽酸鹽0.5g，以0.5mol/L醋酸緩沖液溶解并稀釋至500ml。

【操作】

1.取患者血清0.5ml，加入鐵標(biāo)準(zhǔn)液0.5ml，混勻放置5min，加碳酸鎂粉劑20mg，混勻室溫放置30min，每10min混勻1次。

2. 2000r/min，離心10min，吸取上清液按表6-2操作測定血清鐵含量。

3.混勻，沸水浴中5min，冷卻后離心，取上清液，波長530nm比色。

表6-2　血清鐵測定的操作步驟

4.計算：總鐵結(jié)合力（μmol/L）＝（測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度）×17.91×2

轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度（%）＝（血清鐵/總鐵結(jié)合力）×100

式中17.91為標(biāo)準(zhǔn)管的濃度，2為標(biāo)本的稀釋倍數(shù)。

【注意事項】

1.標(biāo)本可用肝素抗凝，應(yīng)避免溶血，以免血紅蛋白鐵混入。

2.所用器材應(yīng)確保無鐵劑污染，用雙蒸餾水或去離子水配制試劑。

3.離心、煮沸時間要準(zhǔn)確，煮沸離心后若出現(xiàn)上清液渾濁，可加氯仿1.0ml振蕩片刻，離心再取上清液比色。

【參考值】男性：50～77μmol/L，女性：54～77μmol/L。

【臨床意義】

1.增高　常見于缺鐵性貧血、急性肝炎、紅細(xì)胞增多癥等。

2.降低或正?！∫娪阼F粒幼細(xì)胞貧血、惡性腫瘤、再生障礙性貧血、慢性感染、溶血性貧血、腎病綜合征等。

（五）血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體測定

血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體測定（soluble serum transferring receptor，s-TfR）常采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法。

【原理】包被于固相上的特異多克隆血清轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體與待測血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)記的特異性多克隆轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體，與抗原抗體復(fù)合物進(jìn)行特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)記的多克隆抗體，加入底物顯色劑，其顏色深淺與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的量成正比。

【試劑】成品的商品試劑盒

1.辣根過氧化物酶標(biāo)記的多克隆轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體。

2.轉(zhuǎn)鐵蛋白受體標(biāo)準(zhǔn)液。

3.底物1：四甲基苯烯丁。

4.底物2：3%過氧化氫溶液。

5.終止液：0.5mol/L硫酸溶液。

6.洗板液。

【操作】

1.在多克隆白轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體包被的反應(yīng)板上，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液、待檢血清100μl，密封，37℃水浴箱中孵育2h。

2.去掉上清液，用洗板液清洗5次，在吸水紙上拍干。

3.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的多克隆轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的抗體100μl，密封，37℃水浴箱中孵育2h。

4.去掉上清液，用洗板液清洗5次，在吸水紙上拍干。

5.每孔加底物1和底物2各50μl，室溫放置30min。

6.每孔加終止液100μl，在酶標(biāo)儀上波長630nm比色。

7.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出檢測結(jié)果。

【注意事項】

1.標(biāo)本采集后應(yīng)迅速分離血清或血漿。

2.清洗板時要清洗干凈，避免交叉污染。

3.標(biāo)本不能溶血，溶血可使結(jié)果偏高。

【參考值】12.5～26.5nmol/L，各實驗室應(yīng)根據(jù)試劑盒說明書上的參考值進(jìn)行判斷。

【臨床意義】

1.升高：常見于缺鐵性貧血和溶血性貧血。

2.降低：見于再生障礙性貧血、慢性病性貧血、腎衰竭等。

3.用于EPO治療各類貧血的療效觀察和劑量調(diào)整、觀察骨髓移植后的骨髓重建情況及腫瘤化療后骨髓抑制和恢復(fù)情況。