一、目的要求

了解植物病原真菌菌絲體及其變態(tài)和菌組織體、無(wú)性繁殖體和有性生殖體的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征和類型，熟練掌握植物病原真菌的制片方法，初步掌握繪制植物病原真菌草圖的技術(shù)。

二、材料和用具

（一）實(shí)驗(yàn)材料

1.冬瓜綿腐病菌（Pythium a phanidermatum）純培養(yǎng)（菌絲、卵孢子）

2.立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）純培養(yǎng)（菌絲）

3.十字花科蔬菜霜霉?。≒eronospora parasitica）新鮮標(biāo)本（具霜狀霉層）、吸器和卵孢子玻片

4.匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）純培養(yǎng)（假根、孢子囊）、接合孢子玻片

5.柑橘炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides）新鮮標(biāo)本（具黑點(diǎn)）、分生孢子盤和附著胞玻片

6.柑橘煙煤?。∕eliola butleri）附著枝玻片

7.十字花科蔬菜菌核軟腐病（Sclerotinia sclerotiorum）菌核、菌核萌發(fā)，菌核剖面和子囊盤切片玻片

8.蘋果紫紋羽病（Helicobasidium purpureum）根狀菌索

9.麥角?。–laviceps purpurea）麥角萌發(fā)、子座橫切玻片

10.番茄晚疫?。≒hytophthora infestans）新鮮標(biāo)本（具霉層）

11.蕹菜白銹?。ˋlbugo ipomoeae-aquaticae）新鮮標(biāo)本（具霉層）

12.南瓜白粉病（Sphaerotheca Macularis）新鮮標(biāo)本（具白粉）

13.番茄早疫病菌（Alternaria solani）純培養(yǎng)（已產(chǎn)分生孢子）

14.茄褐紋?。≒homopsis vexans）分生孢子器切片玻片

15.茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum）純培養(yǎng)（菌絲）、分生孢子座玻片

16.十字花科蔬菜根腫?。≒lasmodiophora brassicae）休眠孢子切片玻片

17.馬鈴薯粉痂?。⊿pongospora subterranean）休眠孢子堆切片玻片

18.蘋果樹(shù)腐爛病（Valsa mali）子囊殼剖面玻片

19.柑橘瘡痂?。‥lsinoe fawcetti）子囊腔剖面玻片

20.梨銹?。℅ymnos porangium haradanum）冬孢子萌發(fā)玻片

21.小麥白粉?。˙lumeria graminis）新鮮標(biāo)本（具白粉）、閉囊殼切片玻片

（二）實(shí)驗(yàn)用具

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水和乳酚油）、挑針、鑷子、刀片、通草、擦鏡紙、無(wú)菌水等。

三、內(nèi)容和方法

（一）真菌的營(yíng)養(yǎng)體觀察

1.菌絲體

（1）無(wú)隔菌絲

挑取培養(yǎng)皿中的冬瓜綿腐病菌或匍枝根霉菌絲體少許，用蒸餾水或乳酚油作浮載劑，制作臨時(shí)玻片鏡檢，觀察菌絲形態(tài)特點(diǎn)。

（2）有隔菌絲

挑取培養(yǎng)皿中的立枯絲核菌、茄枯萎病菌菌絲體少許，用蒸餾水或乳酚油作浮載劑，制作臨時(shí)玻片鏡檢，觀察菌絲形態(tài)特點(diǎn)。

2.菌絲變態(tài)

（1）吸器

觀察十字花科蔬菜霜霉病菌（玻片）、小麥白粉病菌（撕片）的吸器形態(tài)。

（2）假根

挑取培養(yǎng)皿中的匍枝根霉制片，觀察孢囊梗基部的假根。

（3）附著胞

觀察柑橘炭疽病菌分生孢子萌發(fā)產(chǎn)生的附著胞形態(tài)。

（4）附著枝

觀察柑橘煙煤病菌附著枝形態(tài)。

3.菌組織體

（1）菌核

觀察十字花科蔬菜菌核軟腐病菌菌核的形態(tài)、大小、顏色等，并鏡檢菌核剖面，比較菌核內(nèi)、外部組織細(xì)胞形態(tài)、顏色及排列情況。

（2）菌索

觀察蘋果紫紋羽病菌的根狀菌索。

（3）子座

觀察麥角病菌的頭狀子座及子座橫切玻片，注意子座內(nèi)子囊殼的排列狀。

（二）真菌的繁殖體觀察

1.無(wú)性繁殖體

（1）游動(dòng)孢子囊及游動(dòng)孢子

挑取冬瓜綿腐病菌、番茄晚疫病菌、十字花科蔬菜霜霉病菌，制作臨時(shí)玻片，徒手切蕹菜白銹病病斑，制作臨時(shí)玻片，觀察其孢囊梗、游動(dòng)孢子囊的形態(tài)。 挑取番茄晚疫病菌或蕹菜白銹病菌孢子囊少許于載玻片上的無(wú)菌水中，室溫放置20min左右，觀察游動(dòng)孢子的形成、釋放、游動(dòng)、休止及休止孢的萌發(fā)。

（2）孢子囊及孢囊孢子

挑取匍枝根霉制作臨時(shí)玻片，鏡檢孢子囊和孢囊孢子。 注意觀察孢子囊的結(jié)構(gòu)、囊軸、囊托、孢囊梗與假根的位置。

（3）分生孢子

挑取番茄早疫病菌、茄枯萎病菌，撕取南瓜白粉病菌，制作臨時(shí)玻片，鏡檢觀察。 鏡檢茄褐紋病、茄枯萎病、柑橘炭疽病病原玻片。 注意比較這幾種病原菌分生孢子的形態(tài)、顏色、分隔以及載孢體（分生孢子梗、分生孢子盤、分生孢子器、分生孢子座）形態(tài)。

（4）厚垣孢子

挑取茄枯萎病菌制片，鏡檢。 注意觀察菌絲中或分生孢子中個(gè)別細(xì)胞膨大、細(xì)胞壁加厚的厚垣孢子，觀察其形態(tài)、著生位置及著生方式。

2.有性生殖體

（1）休眠孢子

鏡檢十字花科蔬菜根腫病菌、馬鈴薯粉痂病菌，觀察其休眠孢子的形態(tài)及排列方式。

（2）卵孢子

挑取冬瓜綿腐病菌，制片觀察。 鏡檢十字花科蔬菜霜霉病菌玻片，觀察其卵孢子形態(tài)。

（3）接合孢子

鏡檢匍枝根霉玻片，觀察接合孢子以及接合柄的形態(tài)。

（4）子囊果、子囊及子囊孢子

觀察十字花科蔬菜菌核軟腐病菌菌核萌發(fā)產(chǎn)生的子囊盤形態(tài)，鏡檢其子囊盤切片；鏡檢小麥白粉病菌閉囊殼切片、麥角病菌子座切片、蘋果樹(shù)腐爛病菌子囊殼切片、柑橘瘡痂病菌子囊腔切片。 觀察各種子囊果、子囊及子囊子孢子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)。

（5）擔(dān)子孢子

觀察梨銹病菌冬孢子萌發(fā)形成的有隔擔(dān)子及擔(dān)子孢子的形態(tài)。

四、實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)

3~6學(xué)時(shí)。

五、作業(yè)與思考題

1.試著對(duì)不同病征采用不同制片方法制作病原菌臨時(shí)玻片，并鏡檢。

2.繪制無(wú)隔菌絲、有隔菌絲、各類菌絲變態(tài)、無(wú)性繁殖體和有性生殖體的形態(tài)圖。

3.菌絲有無(wú)隔膜是否能夠反映出一定的進(jìn)化關(guān)系？

4.菌核和子座在形態(tài)和功能上有何不同？

5.真菌吸器的有無(wú)與寄生性的強(qiáng)弱是否有一定關(guān)系？

6.分生孢子和孢囊孢子在生成過(guò)程、形成數(shù)量（與產(chǎn)孢細(xì)胞比較）及著生部位等方面有何不同？

7.如何區(qū)分分生孢子器和子囊殼？

8.卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔(dān)子孢子在有性生殖過(guò)程中形成的時(shí)期有何不同？