檢測細胞凋亡的方法很多，歸納起來可分為形態(tài)學、生物化學以及流式細胞儀三類主要檢測方法。需要說明的是各種檢測技術各具優(yōu)缺點，應根據實驗條件和實驗目的選擇，或多種方法綜合應用，以獲得可靠的結果。

1．形態(tài)學觀察　一般認為形態(tài)學觀察是判斷有無細胞凋亡的基礎，特別是光學顯微鏡檢查，應作為常規(guī)方法。

（1）光學顯微鏡檢查：對組織和細胞進行石蠟包埋、切片經染色后，在光學顯微鏡下觀察，根據細胞形態(tài)學變化特點，判斷或計數凋亡細胞。

（2）電子顯微鏡檢查：標本經固定、脫水、包埋、切片和染色等環(huán)節(jié)處理，利用透射電鏡觀察細胞的特征性形態(tài)學改變，可準確地判斷凋亡細胞（形態(tài)學變化見椎間盤細胞凋亡的形態(tài)學特點）。電子顯微鏡觀察是確定凋亡細胞最具權威的方法。

（3）熒光顯微鏡檢查：體外培養(yǎng)的細胞懸液用吖啶橙（acridineorange）或PI（propridium iodide，PI）染色后（如在切片上進行則需先經RNA酶的作用），在熒光鏡下尋找熒光細胞。熒光鏡檢查的最大優(yōu)點是簡便易行，但一般認為其定量效果較差，故很少單獨使用。

（4）放射自顯影檢查：通過活細胞對放射性物質的特異性攝取以顯示該細胞的功能狀態(tài)。首先將放射性核素標記的物質注入被檢者體內，間隔一定時間后取材，制作切片并涂以薄層感光乳膠，然后暗處曝光，再顯影定影。經以上處理后，會在放射性核素標記部位，光鏡下可觀察到溴化銀被還原為黑色的微細銀粒，凋亡細胞顯影顆粒明顯減少。

另外，除根據形態(tài)變化判斷細胞凋亡外，因椎間盤各部的細胞外基質中均含大量多糖，可用PAS反應，或甲苯胺藍和番紅O染色，觀察基質內多糖的著色情況，根據反應強弱可間接判斷細胞的功能。

2．生物化學檢測

（1）DNA凝膠電泳：正?；罴毎鸇NA電泳為一條區(qū)帶，細胞凋亡時核酸內切酶將DNA分解成規(guī)則的180～200bp的DNA片段。因此凋亡細胞DNA電泳會出現特征性“階梯狀”條帶。該方法將洗滌的細胞進行溶解及DNA的提取是重要步驟。DNA電泳法的缺點是不能進行準確定量。其靈敏性較差，被測標本細胞數在106個以上才能使電泳清晰。

（2）原位末端標記：原位末端標記（in situ end－labeling，ISEL）是通過末端脫氧核苷酸酶（terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）和DNA聚合酶Ⅰ或Klenow大片段把已標記的核苷酸結合到DNA的斷鏈處，再通過一定的顯示系統(tǒng)顯示出來。常用兩種方法：①末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記（terminal deoxynucleotidyl transferase－mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）；②DNA聚合酶Ⅰ或Klenow大片段介導的原位缺口平移（in situ sick translation，INST）。標記方法有核素、熒光素、地高辛或生物素等。

①ISNT，DNA多聚酶將核苷酸整合到凋亡細胞內斷裂的DNA處的3′末端，同時水解5′末端，利用Klenow大片段的5′－3′聚合酶活性，將外源摻入的帶有生物素標記的游離核苷酸從3′羥基末端起始5′－3′方向連接在斷端上以修復DNA，這樣可顯示出有斷裂DNA的細胞。該法同樣也可以用于細胞懸液中凋亡細胞的觀察。

②TUNEL原理與ISNT相似，所介導的酶是TdT，利用TdT將核苷酸從5′末端整和到雙鏈缺損或斷裂的DNA鏈上，以修復DNA，已標記的核苷酸則可顯示出修復的片段。

這兩種方法可以檢測早期凋亡細胞，且特異性和敏感性都較高，就其敏感性而言，TUNEL鑒定高于INST鑒定，尤其在細胞凋亡的早期。

（3）ELISA檢測：細胞凋亡時Ca2＋、Mg2＋依賴性內源性核酸酶將雙鏈DNA從各核小體間連接區(qū)裂斷，產生單或寡核苷酸小體，核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片段組成，可用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測。該法敏感性高，不需要特殊儀器，可檢測5× 102/ml個凋亡細胞。

（4）Annexin－Ⅴ聯(lián)合PI法：正?；罴毎字Y合蛋白－Ⅴ（Annexin－Ⅴ）和PI均低染，凋亡細胞PI高染。文獻報道，凋亡時細胞膜上磷脂酰絲氨酸外露早于DNA斷裂，因此該法檢測早期凋亡較TUNEL更為靈敏，且該法不需固定細胞，避免了TUNEL因固定而出現的DNA片段丟失，是目前最為理想的凋亡定量檢測方法。

（5）Caspase酶學檢查：在適當的溫度和pH條件下，酶催化其特異性底物，形成初級反應產物，然后用捕獲劑捕獲該反應產物，在該酶存在的部位形成有色反應終產物，根據著色深淺，判斷細胞的生命狀況。

3．流式細胞儀檢測　又稱熒光激活細胞分類器（fluorescent activated cell sorter，FACS），通過FACS觀察細胞凋亡有以下特征：①由于細胞內核酸內切酶的激活，使DNA降解，DNA特異性熒光染色減少；②細胞質膜完整；③線粒體仍有膜電位；④保留了ATP依賴的溶酶體質子泵；⑤由于細胞的內源性蛋白酶被激活，蛋白含量明顯減少；⑥凋亡發(fā)生時，前散射光減少，側散射光不變或減少。該方法具有簡單、快速等優(yōu)點，而且可在細胞分類的基礎上，再作進一步的形態(tài)和生化分析。