（一）主要儀器和材料

WRS－1B數(shù)字熔點(diǎn)測(cè)定儀、紅外光譜儀、Bruker ARX600磁共振儀、EI－MS－QP5050質(zhì)譜測(cè)定儀、BUCHI型旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器、葡聚糖凝膠LH－20及柱層析用硅膠、硅膠H、貓爪草乙酸乙酯柱層析5個(gè)分離部位TY1，TY2，TY3，TY4，TY5，石油醚、氯仿、乙酸乙酯等。

（二）方法與結(jié)果

對(duì)乙酸乙酯柱層析分離部位TY1，TY2，TY3，TY4，TY5上葡聚糖凝膠LH－20柱層析、氯仿－甲醇（5∶5）洗脫，進(jìn)行再純化，薄層層析檢視，直至選用3種展開劑均為同一斑點(diǎn)時(shí)，再用熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定熔點(diǎn)，運(yùn)用Mp［α］，EI－MS，NMR等現(xiàn)代技術(shù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)測(cè)定，結(jié)果從中分離鑒定了以下10個(gè)化合物。

1．化合物Ⅰ（15mg）　白色粉末狀結(jié)晶（乙酸乙酯），為二十八烷酸（n－octacosanoic acid）。分子式：CH3（CH2）26COOH｀，解析過(guò)程如下。

熔點(diǎn)（mp）78～80℃，溴酚藍(lán)反應(yīng)呈黃色，示為羧酸類化合物。IR（KBr）cm－1：3126（OH），2917（CH2和CH3反對(duì)稱伸縮振動(dòng)），2850（CH2和CH3對(duì)稱伸縮振動(dòng)），1463，1400（C—H伸縮與彎曲振動(dòng)），1710（C O），728［ρCH峰，示－（CH2）n－中n≥4］。由13　CNMR（CDCl3）譜可知，分子中含有一個(gè)羧酸羰基（179．220），其余碳化學(xué)位移δ均處于較高場(chǎng)（0～40），為烷烴類飽和碳原子，以上特征提示化合物為一長(zhǎng)鏈脂肪酸。1　HNMR（CDCl3）．349處信號(hào)峰為與羰基相連的—CH2—，受C O吸電子影響處于較低場(chǎng)。1．0～1．7為長(zhǎng)鏈—CH2—的堆積峰，0．870處3個(gè)氫為甲基峰，與—CH2—相連，分裂為三重峰。結(jié)合EI－MS（m／z）譜：424（M＋），396（M＋—C O），382，368……73（M＋—C13H27），43［M＋—（CH2）12COOH］，以上MS數(shù)據(jù)符合脂肪酸的裂解規(guī)律，呈現(xiàn)一系列相差14（CH2）的碎片峰，并出現(xiàn)73，129，185等相差56的含羧基的離子碎片峰。綜上分析與文獻(xiàn)報(bào)道二十八酸數(shù)據(jù)基本一致。

2．化合物Ⅱ（18mg）　白色粉末狀結(jié)晶（乙酸乙酯），二十碳酸（n－eicosanoic acid）。

解析過(guò)程：mp　75～76℃，溴酚藍(lán)反應(yīng)呈黃色。EI－MS（m／z）譜：312（M＋），311（M＋—H），297（M＋—CH3），283，269，255，241，227……71，57，43，以上MS數(shù)據(jù)符合文獻(xiàn)報(bào)道的脂肪酸的裂解規(guī)律，呈現(xiàn)一系列相差14（CH2）的碎片峰，并出現(xiàn)73，129，185，241，297等相差56的含羧基的離子碎片峰。由13CNMR（CDCl3）譜可知，分子中含有一個(gè)羧酸羰基（δ179．771），其余碳化學(xué)位移δ均處于較高場(chǎng)（0～40），為烷烴類飽和碳原子，以上特征提示化合物為一長(zhǎng)鏈脂肪酸。1　HNMR（CDCl3）譜δ：2．343處二氫分裂為三重峰，與—CH2—相連，且受C＝O吸電子影響處于較低場(chǎng)。1．0～1．7為長(zhǎng)鏈—CH2—的堆積峰，0．878處3個(gè)H為甲基峰，與—CH2—相連，分裂為三重峰。綜上分析可確定化合物為二十碳酸（n－eicosanoic acid）。

3．化合物Ⅲ（560mg）　白色有光澤的鱗片狀結(jié)晶，為十六碳酸（Hexadecanoic acid），又名軟脂肪酸或棕櫚酸（palmitic acid）。

解析過(guò)程：mp　62～63℃（氯仿），溴酚藍(lán)反應(yīng)呈黃色。EI－MS（m／z）譜確定其分子式為C16H32O2（M＋：256，計(jì)算值：256）；并且與已知化合物十六碳酸的質(zhì)譜信息完全一致。1　HNMR譜）給出了下列質(zhì)子信息，即δ：2．35（2H，d，α－H），δ1．62（2H，d，β－H），δ1．25（24H，S）為δ值相近的12個(gè)亞甲基質(zhì)子的強(qiáng)耦合信號(hào)，δ0．88（3H，t）為長(zhǎng)直鏈烷基末端甲基質(zhì)子信號(hào)。13CNMR譜碳信號(hào)的歸屬如下：δ180．2是羧基碳信號(hào)（C－1）、δ34．1為α－C信號(hào)（C－2）、δ31．9為β－C信號(hào)（C－3），δ29．4（C－4），δ29．7為碳鏈中間8個(gè)δ值近似的亞甲基碳共振信號(hào)（C5～C12），δ29．4（C－13），δ24．7（C－14），δ22．7（C－15），δ14．2是長(zhǎng)直鏈飽和羥基末端甲基碳信號(hào)（C－16）。綜合上述信息，確定化合物Ⅳ為十六碳酸。

4．化合物Ⅳ（137mg）　白色鱗片狀結(jié)晶，為β－谷甾醇（β－sitosterol）。

解析過(guò)程：mp　136～137℃（氯仿），易溶于乙醚、氯仿、難溶于水，Liberman－Burchard反應(yīng)呈綠色，與三氯化銻試劑反應(yīng)呈紫色，說(shuō)明其為甾體化合物。EI－MS（m／z）譜，確定其分子式為C29H50O（M＋：414，計(jì)算值414）；1　HNMR譜（DMSO－d6）13　CNMR譜（CDCI3））。碳信號(hào)的歸屬如下：δ37．3（C－1），δ31．6（C－2），δ71．8（C－3），δ42．3（C－4），δ140．8（C5），δ121．7（C－6），δ31．9（C－7），δ31．9（C－8），δ50．1（C－9），δ36．5（C－10），δ21．1（C－11），δ39．8（C－12），δ42．3（C－13），δ56．8（C－14），δ24．3（C－15），δ28．3（C－16），δ56．1（C－17），δ19．0（C－18），δ11．98（C－19），δ36．2（C－20），δ19．0（C－21），δ33．9（C－22），δ24．3（C－23），δ45．8（C－24），δ29．1（C－25），δ19．8（C－26），δ18．8（C－27），δ23．1（C－28），δ11．9（C－29）。與β－谷甾醇的文獻(xiàn)譜圖一致，綜上信息確定化合物Ⅵ的結(jié)構(gòu)為豆甾－5－烯－3β－醇，即為β－谷甾醇（β－sitosterol）。

5．化合物Ⅴ（120mg）　白色粉末，為β－棕櫚酸甘油酯。

解析過(guò)程：mp　72～75℃，EI－MS m／z（%）：331（M＋＋1，1．3），330（M＋，2．7），257（9．2），239（38．0），154（6．0），134（30．0），98（71．2），74（63．2），43（100）。1　HNMR（pydine）δ：5．57（1H，m，J＝5．8Hz，CH＊OC O），5．32（4H，d，J＝5．8Hz，CH2＊OH），3．44（2H，t，J＝7．3Hz，CH2＊C O），2．53～2．40（26H，m），1．98（3H，t，J＝7．5Hz，CH3）。13CNMR（pydine）δ：173．2（1－C），73．8（2′－C），64．6（1′，3′－C），34．22（2－C），29．8～29．2（3～14－C），22．7（15－C），14．0（16－C）。根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定為β－棕櫚酸甘油酯。對(duì)其進(jìn)行堿水解，得到了棕櫚酸。

6．化合物Ⅵ（82mg）　白色粉末，為β－硬脂酸甘油酯。

解析過(guò)程：mp　76～78℃，EI－MS m／z（%）：359（M＋＋1，0．9），358（M＋，1．6），285（11．3），267（26．4），239（12．8），154（14．8），134（54．0），112（32．0），98（100），74（67．2），43（99．2）。1　HNMR（pydine）δ：5．65（1H，m，J＝5．2Hz，CH＊OC O），5．35（4H，d，J＝5．2Hz，CH2＊OH），3．48（2H，t，J＝7．3Hz，CH2＊C O），2．53～2．40（30H，m），1．92（3H，t，J＝7．1Hz，CH3）。13　CNMR（pydine）δ：173．7（1－C），73．0（2′－C），64．4（1′，3′－C），34．0（2－C），29．7～29．1（3～16－C），22．5（17－C），14．1（18－C）。HMBC譜中甘油2′－H與硬脂酸羰基C有遠(yuǎn)程相關(guān)，說(shuō)明硬脂酸與甘油2′位成酯。根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定為β－硬脂酸甘油酯。

7．化合物Ⅶ（53mg）　白色膏狀物，為鄰苯二甲酸正丁酯。

解析過(guò)程：易溶于石油醚，mp　46～49℃，EI－MS m／z（%）：278（M＋，0．40），223（4．80），205（4．0），149（100），121（3．2），104（6．0），76（6．4），65（4．0），41（6．8）。1　HNMR（DMSO）δ：7．69（2H，br．，J＝6．7Hz，3，6－H），7．51（2H，t，J＝6．7Hz，4，5－H），4．14（2H，t，J＝7．0Hz， 1′－H），1．36（2H，m，J＝7．0Hz，2′－H），1．18（2H，m，J＝7．0Hz，3′－H），0．89（3H，t，J＝7．0Hz，4′－H）；13CNMR（DMSO）δ：187．1（C O），132．8（1，2－C），1136．9（4，5－C），129．2（3，6－C），68．1（1′－C），29．0（2′－C），22．9（3′－C），14．4（4′－C）。根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定此化合物為鄰苯二甲酸正丁酯。

8．化合物Ⅷ（82mg）　無(wú)色針晶，為3，4－二羥基－苯丙氨酸乙酯。

解析過(guò)程：mp　123～126℃，EIMS m／z（%））：226（M＋＋1，6．8），225（M＋，3．2），196（2．4），152（2．8），123（100．0），107（3．6），89（1．2），77（13．2），51（9．6）。1　HNMR（DMSO）δ：8．68（1H，br．，6－OH），8．60（1H，br．，7－OH），6．64（1H，d，J＝7．7Hz，8－H），6．58（1H，d，J＝2．5Hz，5－H），6．42（1H，dd，J＝7．7Hz，2．5Hz，9－H），5．43（2H，d，J＝19．9Hz，2－NH2），4．12（1H，m，2－H），4．04（2H，q，J＝7．0Hz，1′－H），2．75（1H，dd，J＝11．7Hz，5．7Hz，3－aH），2．64（1H，dd，J＝11．7Hz，5．7Hz，3－bH），1．15（3H，t，J＝7．0Hz，2′－H）。13　CNMR（DMSO）δ：174．7（1－C），145．4（6－C），144．3（7－C），128．9（4－C），120．7（5－C），117．4（8－C），115．9（9－C），72．3（2－C），60．5（1′－C），41．3（3－C），14．7（2′－C）。由以上數(shù)據(jù)確定此化合物為3，4－二羥基－苯丙氨酸乙酯。

9．化合物Ⅸ（34mg）　棕紅油狀物，為5－羥甲基糠醛。

解析過(guò)程：EI－MS m／z（%）：126（M＋，78．0），125（14．4），109（13．6），97（100．0），81（5．6），69（32．8），53（14．4），41（73．3）。1　HNMR（DMSO）δ：9．54（1H，s，2′－H），7．47（1H，d，J＝3．5Hz，3－H），6．59（1H，d，J＝3．5Hz，4－H），5．55（1H，br．，5′－OH），4．51（2H，s，5′－H）。13CNMR（DMSO）δ：178．5（2′－C），162．8（2－C），152．4（5－C），124．9（3－C），110．3（4－C），56．6（5′－C）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道5－羥甲基糠醛一致。

10．化合物Ⅹ（27mg）　無(wú)色粉末，為5－羥甲基糠酸。

解析過(guò)程：mp　169～172℃，EI－MS m／z（%）：142（M＋，19．6），124（4．4），97（100），96（11．6），79（16．0），69（26．8），51（34．8），41（42．8）。1　HNMR（MeOD）δ：7．15（1H，d，J＝3．4Hz，3－H），6．46（1H，d，J＝3．4Hz，4－H），4．75（1H，br．，5′－OH），4．57（2H，s，5′－H）。13CNMR（MeOD）δ：161．8（2′－C），160．6（2－C），145．8（5－C），119．8（3－C），110．1（4－C），57．5（5′－C）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道5－羥甲基糠酸一致。

本實(shí)驗(yàn)從貓爪草乙酸乙酯部位分離鑒定了10種化合物，其中：二十八烷酸（n－octacosanoic acid）、β－棕櫚酸甘油酯（glycerolβ－palmitate）、β－硬脂酸甘油酯（glycerolβ－steariate）、鄰苯二甲酸正丁酯（1，2－benzenedicarboxylic acid，dibutyl ester）、3，4－二羥基－苯丙氨酸甲酯（3，4－dihydroxyl－phenylalanine methyl ester）、5－羥甲基糠醛（5－h(huán)ydroxymethyl furaldehyde）、5－羥甲基糠酸（5－h(huán)ydroxymethyl furoic acid）等7種成分系首次從毛茛屬植物中得到。