一、目的要求

認識壺菌、接合菌真菌的一般形態(tài)及其所致植物病害的癥狀特點，了解異宗配合與同宗配合的含義及同型配子囊與異型配子囊的差別。

二、材料和用具

（一）實驗材料

甘薯軟腐病菌（Rhizopus stolonifer）、犁頭霉（Absidia sp.）和毛霉（Mucor sp.）“＋”“－”菌株的斜面培養(yǎng)物或平板培養(yǎng)物。

玉米褐斑病菌（Physoderma maydis）、馬鈴薯癌腫病菌（Synchytrium endobioticum）、甘薯軟腐病菌（Rhizopus stolonifer）及病害標本。

PDA培養(yǎng)基。

（二）實驗用具

滅菌培養(yǎng)皿、酒精燈、火柴、紗布、挑針、鑷子、刀片、通草、載玻片、蓋玻片、浮載劑、吸水紙、顯微鏡、擦鏡紙等。

三、內(nèi)容和方法

（一）壺菌綱（Chytridiomycetes）

1.節(jié)壺屬（Physoderma）

觀察由玉蜀黍節(jié)壺菌（P.maydis）為害玉米引起的褐斑病標本，注意觀察受害部位的病斑顏色及特點。 用挑針挑取受害病組織內(nèi)呈黃褐色粉末狀物制成臨時玻片，或徒手切病斑，制臨時玻片，或直接鏡檢玉蜀黍節(jié)壺菌的永久玻片，觀察休眠孢子囊的顏色和形態(tài)特征。

2.集壺菌屬（Synchytrium）

觀察內(nèi)生集壺菌（S.endobioticum）為害馬鈴薯引起的馬鈴薯癌腫病標本，注意觀察受害部位病斑形狀、顏色等特點。 用挑針挑取受害病組織內(nèi)呈黃褐色粉末狀物制成臨時玻片，或直接鏡檢內(nèi)生集壺菌的永久玻片，觀察休眠孢子囊堆的形態(tài)特征。

（二）接合菌綱（Zygomycetes）

1.根霉屬（Rhizopus）

觀察甘薯軟腐病癥狀特征。用挑針挑取霉層制片、鏡檢，觀察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗、囊軸、假根及其匍匐枝的形態(tài)。

2.毛霉屬（Mucor）

挑取平板培養(yǎng)的毛霉培養(yǎng)物制作臨時玻片，鏡檢觀察菌絲、孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗的形態(tài)特征。

3.犁頭霉屬（Absidia）

挑取平板培養(yǎng)的犁頭霉培養(yǎng)物制作臨時玻片，鏡檢觀察菌絲、孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗、假根及其匍匐枝的形態(tài)特征。 注意觀察假根和孢囊梗的位置并與根霉屬相比較。

4.笄霉屬（Choanephora）

形成大小兩種類型的孢子囊，一般在條件不適時，產(chǎn)生大型孢子囊，大型孢子囊產(chǎn)生在頂端彎曲的孢囊梗上，其內(nèi)產(chǎn)生大量孢囊孢子，孢子頂端有數(shù)根細毛。 通常形成小型孢子囊，小型孢子囊著生在孢囊梗頂端膨體上產(chǎn)生的許多小枝末端形成的膨大囊狀體表面突起的小梗上。 該菌為害花和果實，引起花腐和果腐。 鏡檢笄霉的孢囊梗和孢子囊形態(tài)，注意觀察該屬與根霉屬、毛霉屬的區(qū)別。

（三）異宗配合現(xiàn)象與接合孢子

1.異宗配合現(xiàn)象的觀察

取具有“＋”“－”性征分化并有親和性的根霉、毛霉或犁頭霉的2個菌株，分別對峙培養(yǎng)接種，每種菌接種3塊平板，在平板底部寫上所接種的菌株編號、接種日期，在25℃溫箱中培養(yǎng)1周，觀察異宗配合現(xiàn)象，并記錄哪個培養(yǎng)皿中形成了接合孢子。

2.接合孢子的觀察

從產(chǎn)生接合孢子平板中間的接合線上挑取培養(yǎng)物制作臨時玻片，觀察原配子囊、配囊柄及配子囊的發(fā)育過程，注意觀察配囊柄的形狀及大小。

四、實驗學(xué)時

2~3學(xué)時。

五、作業(yè)與思考題

1.繪制接合孢子形態(tài)圖。

2.繪制匍枝根霉孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐枝圖。

3.何謂同宗配合、異宗配合？你所配對培養(yǎng)的平板中哪種配對組合產(chǎn)生了接合孢子，原因是什么？

4.何謂同型配子囊、異型配子囊？