四、茚三酮反應(yīng)

（一）實(shí)驗(yàn)原理

凡含有自由氨基的化合物，如蛋白質(zhì)、多肽、各種氨基酸（除脯氨酸、羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)外）和伯胺化合物（包括氨）與茚三酮共熱時(shí)，都能生成紫色化合物，這種反應(yīng)稱(chēng)為茚三酮反應(yīng)。所有α-氨基酸及一切蛋白質(zhì)都能和茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)。

該反應(yīng)靈敏度高，1∶1500000濃度的氨基酸水溶液即呈現(xiàn)茚三酮反應(yīng)，是一種常用的氨基酸定量測(cè)定方法。

茚三酮反應(yīng)分為兩步，第一步是氨基酸被氧化形成CO₂、NH₃和醛，水合茚三酮被還原成還原型茚三酮；第二步是所形成的還原型茚三酮同另一個(gè)水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質(zhì)。反應(yīng)機(jī)理如下：

茚三酮反應(yīng)的適宜pH值為5～7，同一濃度的蛋白質(zhì)或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同，酸度過(guò)大時(shí)甚至不顯色。

（二）實(shí)驗(yàn)藥品

1．蛋白質(zhì)溶液：新鮮雞蛋白溶液（雞蛋清：水＝1∶9）；

2．0.5％甘氨酸溶液；

3．0.1％茚三酮水溶液；

4．0.1％茚三酮-乙醇溶液。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1．取2支試管，分別加入蛋白質(zhì)溶液1ml和甘氨酸溶液1mL，再各加0.5mL0.1％茚三酮水溶液混勻，在沸水浴中加熱1～2min，待冷卻后溶液即呈粉紅色，以后慢慢變成紫色或藍(lán)色。

2．在一小塊濾紙上滴上1滴0.5％的甘氨酸溶液，風(fēng)干后，再在原處滴上1滴0.1％的茚三酮乙醇溶液，用微火烘干顯色，觀察紫紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)。

（四）實(shí)驗(yàn)記錄