3．3．1　Cu，Zn－SOD的活性中心及其催化機(jī)理

3．3．1．1　Cu，Zn－SOD的活性中心氨基酸殘基的保守性

從1980年獲得的2分辨率電子密度圖中，可以比較清晰地看到牛血紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD活性中心附近氨基酸位置的排列，如圖3－14所示，結(jié)合底物O^2－的是一個(gè)橢圓形的“口袋”，長(zhǎng)15，寬9，深6，口袋外緣一邊由Thr135，Gly136，Ala138和Gly139組成，另一邊由Gly59，Pro60，His61以及Phe62和Asn63組成，Lys134和Arg141的側(cè)鏈鎖住口袋兩側(cè)，口袋底部是Cu，Zn，Asn81以及His118，His44，His78和His69。高分辨率的譜已經(jīng)揭示人紅細(xì)胞、酵母和麥胚的Cu，Zn－SOD與牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD的活性中心構(gòu)象是相同的。對(duì)SOD中金屬輔基配位場(chǎng)幾何構(gòu)型研究是探討活性中心結(jié)構(gòu)的重要方面，應(yīng)用ESR，NMR，化學(xué)修飾結(jié)合X射線晶體結(jié)構(gòu)分析，確定了Cu是與四個(gè)His殘基咪唑環(huán)的N原子構(gòu)成近似四方平面的配位結(jié)構(gòu)，Cu和Zn之間通過(guò)共同連接His61而形成“咪唑橋”結(jié)構(gòu)。

圖3－14　牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD活性中心的“咪唑橋”結(jié)構(gòu)示意圖

如圖3－14所示，Cu，Zn－SOD活性中心中，Cu^2＋被四個(gè)組氨酸殘基His44、His46、His61和His118的咪唑環(huán)上的N原子配位，另外一個(gè)水分子中的O在軸向與Cu^2＋配位構(gòu)成一個(gè)畸變的N₄O四方錐結(jié)構(gòu)，而Zn^2＋被His61，His69，His78咪唑環(huán)上的N原子和Asp81的一個(gè)羧基O原子配位形成一個(gè)近似N₃O四面體的結(jié)構(gòu)。His61的咪唑起著橋的作用，將Cu^2＋，Zn^2＋連接起來(lái)，Cu^2＋與Zn^2＋之間間距為6．3。

當(dāng)除去或與其他金屬離子取代SOD活性中心結(jié)構(gòu)中的Zn^2＋時(shí)，SOD仍然保持較高的活性，但是當(dāng)Cu^2＋被除去或者被其他金屬離子取代時(shí)，則酶活性幾乎喪失，表明Cu^2＋是具有活性不可缺少的因素。

在應(yīng)用組氨酸C－2質(zhì)子交換技術(shù)和γ－線擾動(dòng)角關(guān)聯(lián)（PAC）技術(shù)研究酵母Cu，Zn－SOD中金屬與酶蛋白的配位關(guān)系后，有人對(duì)活性中心的“咪唑橋”結(jié)構(gòu)提出疑義，認(rèn)為H63（即相對(duì)于牛酶中的H61）很可能單獨(dú)與Zn配位。由于不同來(lái)源的Cu，Zn－SOD之間具有結(jié)構(gòu)的同一性，所以推測(cè)由酵母酶得到的結(jié)論可以推廣到其他來(lái)源的Cu，Zn－SOD，即酶的活性中心不一定呈現(xiàn)“咪唑橋”結(jié)構(gòu)特征。

“咪唑橋”結(jié)構(gòu)的提出是基于X射線晶體結(jié)構(gòu)分析，而酵母酶的工作是基于溶液構(gòu)象研究，晶體結(jié)構(gòu)與溶液構(gòu)象之間出現(xiàn)某些差別是可以理解的，更重要的是“咪唑橋”活性中心絕非剛性的固定結(jié)構(gòu)，而應(yīng)該是一種柔韌的靈活的連結(jié)，任何化學(xué)、物理的因素都可能影響它，而這種若即若離的結(jié)構(gòu)靈活性可能正是酶發(fā)揮催化功能所必需的。

ESR和電子能譜測(cè)定Cu，Zn－SOD中Cu的超精細(xì)偶合常數(shù)A₁₁為0．143cm^－1，這是典型五配位Cu配合物的值。而NMR對(duì)Cu，Zn－SOD水溶液中水的質(zhì)子交換弛豫時(shí)間測(cè)定，發(fā)現(xiàn)Cu與組氨酸咪唑環(huán)N原子構(gòu)成的四方平面配位場(chǎng)的軸向位置上還結(jié)合有1分子H₂O，從2分辨率電子密度圖上也發(fā)現(xiàn)Cu的軸向位置上有1水分子的吸收峰，而Fe－SOD和Mn－SOD的金屬離子上也都結(jié)合有1個(gè)水分子，這1個(gè)水分子的存在可能與催化機(jī)理有關(guān)。

利用高分辨率的H NMR譜，ESR，NMR化學(xué)修飾等方法結(jié)合X射線晶體結(jié)構(gòu)分析，不同來(lái)源的SOD分子的活性中心結(jié)構(gòu)大體相同。各種來(lái)源的SOD的C_α骨架結(jié)構(gòu)極其相似，只有少數(shù)的殘基發(fā)生變化。圖3－15為各種來(lái)源的Cu，Zn－SOD活性中心結(jié)構(gòu)圖。

圖3－15　不同來(lái)源的Cu，Zn－SOD活性中心結(jié)構(gòu)圖

3．3．1．2　Cu，Zn－SOD的活性中心的金屬結(jié)合位點(diǎn)

A．人Cu，Zn－SOD及其突變體M4SOD單體的金屬結(jié)合部位

通過(guò)改變疏水界面亞基的疏水殘基制備了一些人SOD的單體，這些變異盡管遠(yuǎn)離活性中心但是卻極大地減少了催化效率。4個(gè)疏水殘基（50苯丙氨酸，51甘氨酸，148纈氨酸，151異亮氨酸）突變成2個(gè)谷氨酸和2個(gè)賴氨酸，雖然保持和天然二聚體SOD相同的電荷，卻僅保持25%的活性。

圖3－16描繪了金屬結(jié)合位點(diǎn)。所有的金屬配體都有明顯的結(jié)構(gòu)，Cu（Ⅰ）與His46，His48，His120相協(xié)調(diào)，His63的Nε2原子質(zhì)子化并通過(guò)Nδ1和鋅結(jié)合，進(jìn)一步與His71，His80和Asp83結(jié)合，呈現(xiàn)出通常的四面體配位。Cu（Ⅰ）離子從N的三個(gè)配體形成的平面向與His63的Nε2質(zhì)子相反的方向上偏離0．4，這個(gè)質(zhì)子位于距銅2．9處。這會(huì)導(dǎo)致扭曲的三角配位幾何體從Cu原子背離120°。His63位于活性中心腔的中間，從Arg143的胍基和腔的開(kāi)口處掩蔽Cu（Ⅰ）離子，在這個(gè)結(jié)構(gòu)中，Cu（Ⅰ）離子完全被蛋白原子埋藏在沒(méi)有溶劑可及的表面。

圖3－16　還原型人Cu，Zn－SOD突變體M4SOD的金屬離子和其配體的結(jié)構(gòu)

（摘自Banci I B，et al．JBIC，1999）

圖3－17　Q133M突變體Cu，Zn－SOD二級(jí)結(jié)構(gòu)圖

（摘自Getzoff E D，et al．Nature，1983）圖中標(biāo)示出折疊及環(huán)的編號(hào)和位置（該編號(hào)與正常Cu，Zn－SOD相同）

B．牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD5RN中的金屬位點(diǎn)

圖3－18　SOD5RN A，B亞基中Cu位點(diǎn)的不同（3F₀－2F_C）傅里葉圖的立體概貌

為清晰起見(jiàn)，忽略了His46殘基的電子密度。（摘自S Mangani，et al．JBIC，1998）

圖3－18顯示了SOD5RN A，B亞基中金屬位點(diǎn)的不同3F₀－2F_C傅里葉圖的立體概貌。正如已經(jīng)在還原型牛Cu，Zn－SOD（pH為7．5）結(jié)構(gòu)中觀察到的，在A亞基中Cu（Ⅰ）與四個(gè)His相連，并且通過(guò)His61橋與Zn相連，其Cu與His61的Nε2的距離仍然為2．2，另一方面，B亞基中的His61出現(xiàn)了紊亂，以致它的Nε2與Cu的距離為2．4。然而，A亞基最重要的特點(diǎn)是銅離子附近額外的高電子云的出現(xiàn)，這種高電子云并不是通常在凹槽中找到的水分子所產(chǎn)生的。然而，電子云圖譜清晰地表明，剩余的金屬被4個(gè)His側(cè)鏈所連接，連接距離為從2．1～2．3。

在B亞基中卻出現(xiàn)了不同的情況，銅原子被這4個(gè)His圍著，同時(shí)，水分子占據(jù)了銅的第五位置，且與銅保持2．5的距離，然而在圖3－18（b）中可以看到水分子跟其他鏈的電子云一樣，都很分散，這表明它們所處的狀態(tài)是紊亂的。另外，His61的咪唑環(huán)偏離在Cu與Zn之間的最佳橋位。Nε2處于銅與水分子之間的連線的中點(diǎn)處，Cu和水分子與Nε2的距離均是2．4。

表3－3　pH 5．0條件下的還原性Cu，Zn－SOD的Cu（Ⅰ）和Zn（Ⅱ）的配位球的鍵長(zhǎng)和鍵角比較

①pH為7．5條件下的還原性Cu，Zn－SOD的鍵長(zhǎng)對(duì)比。

最后值得一提的是，A，B亞基中不同的銅連接是跟兩亞基的不同晶體環(huán)境有關(guān)的。事實(shí)上，通過(guò)對(duì)分子接觸的分析，發(fā)現(xiàn)A亞基的兩個(gè)環(huán)（環(huán)Ⅳ和Ⅶ）用11個(gè)殘基組成了16次接觸，而在B亞基中，有2個(gè)殘基在環(huán)Ⅶ中的殘基形成了6次接觸，分子間的接觸是由環(huán)Ⅳ和Ⅶ促成的；而這兩環(huán)又是構(gòu)建活性部位所需蛋白質(zhì)的外在部分。環(huán)的編號(hào)及位置見(jiàn)圖3－17。

圖3－19　SOD5RAZ中A，B亞基中銅位點(diǎn)的不同（3F₀－2F_C）傅里葉圖

為清晰起見(jiàn)，忽略了His46殘基的電子密度。（摘自S Mangani，et al．JBIC，1998）

C．牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD5RSCN中的金屬位點(diǎn)

圖3－20（a）、（b）顯示了SOD5RSCN A，B亞基中的Cu位點(diǎn)的不同傅里葉圖。盡管B亞基中的電子云不夠強(qiáng)烈，仍然可以清楚地看到細(xì)長(zhǎng)的電子云從銅延伸到活性部位的位點(diǎn)。A，B亞基位點(diǎn)中的SCN^－被固定于電子云中，并且被修正為其最近原子與Cu（Ⅰ）的距離為2．6。

A亞基中銅也表現(xiàn)得更有規(guī)則，且?guī)缀螆D形更接近三角雙錐（His61和His118處于軸心配體上）。然而B(niǎo)亞基是一個(gè)扭曲的四面體結(jié)構(gòu)，有SCN^－輕微的作用。在A亞基中，His61與Cu（Ⅰ）連接且之間距離為2．2，然而在B亞基中，His61處于SCN^－的N與Cu之間的中點(diǎn)處（距離分別為2．5和2．3）。再次表明His61咪唑環(huán)的紊亂狀態(tài)并且與Cu分離。

3．3．1．3　Cu，Zn－SOD的活性中心的活性通道

（1）活性通道。圖3－17標(biāo)示出了Cu，Zn－SOD二級(jí)結(jié)構(gòu)的環(huán)及折疊的位置及編號(hào)?；钚酝ǖ烙?3～60的氨基酸殘基組成的環(huán)（Ⅳ）和環(huán)130～143的氨基酸殘基組成的環(huán)（Ⅶ）的一部分組成。后者帶有電荷。這些保守的氨基酸殘基提供的靜電勢(shì)使得底物可以運(yùn)動(dòng)到反應(yīng)位點(diǎn)。這個(gè)環(huán)是有序的，Thr137，Glu132，Lys136和Gln133在3F₀－2F_C圖中有確定的電子密度。

但是，側(cè)鏈Arg143決定著超氧化物的正確取向，它在催化腔內(nèi)是非常保守的，并且電子云高度無(wú)序。

圖3－20　SOD5RSCN A，B亞基中的Cu位點(diǎn)的不同（3F₀－2F_C）傅里葉圖

為清晰起見(jiàn)，忽略了His46殘基的電子密度。（摘自S Mangani，et al．JBIC，1998）

由于環(huán)（Ⅳ）的變動(dòng)使得活性腔的寬度和深度比野生型Cu，Zn－SOD的略微增加，在野生型Cu，Zn－SOD中寬度是21，深度是11，而現(xiàn)在寬度變?yōu)?3，深度變?yōu)?3。另外第二個(gè)活性位點(diǎn)內(nèi)137位的蘇氨酸和143位的精氨酸的C_α的距離增加到2。有趣的是，這些結(jié)果和還原型單體溶液的結(jié)構(gòu)形成了強(qiáng)烈的對(duì)比，在還原型單體溶液結(jié)構(gòu)中正好相反。實(shí)際上，在還原型單體溶液結(jié)構(gòu)中縫的寬度比在人的氧化型二聚體SOD中減少到了3。在其他Cu，Zn－SOD中，活性通道結(jié)構(gòu)是非常有序的，在蛋白質(zhì)表面，水分子和金屬位點(diǎn)相結(jié)合。

（2）活性通道的構(gòu)象及組成。已知Cu，Zn－SOD的活性受到活性通道靜電區(qū)域的高度影響，這個(gè)區(qū)域可以使得底物向活性區(qū)域的銅離子靠近。每個(gè)亞基分子的兩個(gè)部分都包括這個(gè)通道的構(gòu)象：①環(huán)（Ⅶ），這個(gè)環(huán)中帶負(fù)電荷和正電荷殘基組成了正確的靜電區(qū)域來(lái)吸引陰離子的亞基；②環(huán)（Ⅳ）中Cys57和Cys146位的半胱氨酸的二硫鍵。該二硫鍵的存在對(duì)二聚體酶的構(gòu)象的改變有很大的關(guān)系，并且它是高度無(wú)序的。

在野生型Cu，Zn－SOD中，Arg143通過(guò)和環(huán)（Ⅳ）中的Cys57的羰基氧形成一個(gè)氫鍵來(lái)與環(huán)（Ⅳ）相互作用，這個(gè)氫鍵對(duì)Arg143在腔內(nèi)的定位是非常重要的。這個(gè)重要的催化殘基的側(cè)鏈的無(wú)序性是由環(huán)（Ⅳ）中的二硫鍵的高度靈活性所導(dǎo)致的。亞基的Cys57無(wú)序使得Arg143不在環(huán)（Ⅳ）上，這就是它具有高水平移動(dòng)性的原因。

（3）人Cu，Zn－SOD單體突變體的活性通道。通過(guò)改變疏水界面亞基的疏水殘基制備了一些人SOD的單體，這些變異盡管遠(yuǎn)離活性中心但是卻極大地減少了催化效率。4個(gè)疏水殘基（Phe50，Gly51，Val148，Ile151）突變成2個(gè)Glu和2個(gè)Lys，雖然保持和天然二聚體SOD相同的電荷，卻僅保持25%的活性。

單體在腔的大小尤其是腔內(nèi)活性位點(diǎn)的入口的寬度是不同的。對(duì)其溶液進(jìn)行共振離子化質(zhì)譜法分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)的一端是Thr58位，另外一端是Lys136。這個(gè)入口的寬度比在二聚體中的寬度有所減少，在HSOD中Thr58的CO－Nξ到Lys136的距離是15，M4SOD中是13，在E133QM2SOD中是11?？梢宰⒁獾揭粋€(gè)有趣的現(xiàn)象，就是隨著這些酶的活性的減少，與之相關(guān)的寬度也在減小。

短的α－螺旋構(gòu)成環(huán)（Ⅶ）的初始結(jié)構(gòu)，實(shí)際上是一個(gè)小的但有意義的軸向移動(dòng)，它的初始部分（殘基132和133）使得它向酶活性部位通道相反方向的靠近，這個(gè)移動(dòng)促成了活性部位的入口的寬度減少，并且造成廣泛的氫鍵網(wǎng)絡(luò)在靜電環(huán)內(nèi)的重排，從而影響帶電側(cè)鏈的構(gòu)象。

帶電殘基的最主要的變化發(fā)生在：靜電環(huán)的132位的帶電的Glu殘基和位于催化腔的相反方向的Arg143。前一個(gè)殘基與Lys136之間形成一個(gè)強(qiáng)的氫鍵相互作用，也可以和Glu133形成一個(gè)強(qiáng)的氫鍵相互作用。這兩個(gè)Glu帶負(fù)電的羧基均指向Lys136。這是由于Glu132側(cè)鏈的大的移動(dòng)造成的，Glu132比在HSOD中更靠近銅離子，現(xiàn)在位于活性中心通道的一個(gè)邊緣，在這個(gè)入口處產(chǎn)生了更多的負(fù)電勢(shì)。在E133QM2SOD中，也觀察到Glu133的盡管比較小但相似的移動(dòng)，因此，這種重新定向是單體化的結(jié)果。另一方面，在HSOD中，Glu132指向溶劑并且不和Lys136發(fā)生任何作用。

圖3－21　還原型M4SOD的靜電環(huán)的活性中心通道的立體圖，和氧化型的人Cu，Zn－SOD的一個(gè)亞基

（摘自Banci I Bertini，et al．JBIC，1999）

活性部位的催化腔的深處有Arg143和Thr135，在所有的二聚體的酶的晶體結(jié)構(gòu)中這種定向效應(yīng)在側(cè)鏈上是很保守的。和Arg143的NηH₂基團(tuán)與Cys57羰基氧及Thr58的羰基氧形成氫鍵。在M4SOD中，前一個(gè)氫鍵被破壞掉，但是在整個(gè)結(jié)構(gòu)中與Thr58CO之間的相互作用仍然存在。在M4SOD中，由于50～68之間的環(huán)的無(wú)序，Cys57和Thr58也是高度無(wú)序的，并且與HSOD中的構(gòu)象不同。因此，雖然Arg143和Thr58之間的氫鍵是保守的，但Arg143卻改變了構(gòu)象。它的側(cè)鏈離開(kāi)銅離子向活性區(qū)域開(kāi)口靠近，胍基氮大約離Cu（Ⅰ）有9（在HSOD為6），因此從溶液中隱藏了金屬位點(diǎn)。與HSOD相比，E133QM2SOD的X－射線衍射結(jié)構(gòu)和溶液結(jié)構(gòu)中均觀察到，Arg143位置遠(yuǎn)離銅離子。

所有的結(jié)構(gòu)中，Thr135的構(gòu)象是必不可少的，這個(gè)殘基對(duì)著Arg143，并且和Arg一起形成活性中心的較深的第二個(gè)瓶頸結(jié)構(gòu)。在M4SOD中，盡管它與HSOD具有相同的電荷，這個(gè)瓶頸的寬度比HSOD的要窄，這與M4SOD的酶活性減少是一致的。

在E133QM2SOD中，用Gln代替Glu133，可以導(dǎo)致Thr135發(fā)生輕微的移動(dòng)，這個(gè)蘇氨酸與谷氨酰胺可以產(chǎn)生強(qiáng)的氫鍵相互作用，這個(gè)輕微的改變可以打開(kāi)活性區(qū)域的入口，因此，這個(gè)突變除了可以減少活性中心入口處的負(fù)電荷外，還可以增加入口的寬度。

總的來(lái)說(shuō)，單體化導(dǎo)致環(huán)（Ⅳ）的無(wú)序性增加，這可以從α－螺旋的定向效應(yīng)的改變以及靜電環(huán)的重排反映出來(lái)。隨之而來(lái)的，入口處的寬度減小，荷電殘基形成氫鍵的模式發(fā)生改變。后者的特性促成蛋白質(zhì)表面的靜電勢(shì)發(fā)生改變，這是超氧化物擴(kuò)散進(jìn)入活性位點(diǎn)的決定因素。因此，單體誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)改變，這個(gè)改變可以是空間結(jié)構(gòu)的改變，也可以是活性區(qū)域靜電勢(shì)的改變。

3．3．1．4　Cu，Zn－SOD的催化機(jī)制

組氨酸是首先被發(fā)現(xiàn)與金屬輔基Cu和Zn相連且與酶的催化活性直接相關(guān)的氨基酸殘基。這主要來(lái)自三方面的實(shí)驗(yàn)證據(jù)：一是光敏氧化失活，二是化學(xué)修飾觀察，三是輻射失活實(shí)驗(yàn)。

在有光敏染料亞甲藍(lán)存在的條件下，去除Cu，Zn后的酶蛋白經(jīng)光照后組氨酸殘基遭到破壞，這時(shí)再加入Cu、Zn離子，酶活性不能修復(fù)。用組氨酸特異性試劑重氮¹H－四唑（DHT）修飾發(fā)光細(xì)菌中提取的Fe－SOD，發(fā)現(xiàn)經(jīng)DHT修飾后的酶完全失去活性，而且去Fe后的酶蛋白經(jīng)修飾后再加入Fe就不能重組復(fù)活。對(duì)牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD的重組研究表明，去除Cu，Zn后的酶蛋白經(jīng)較低劑量γ－射線照射后就喪失了再與Cu、Zn重組復(fù)活的能力。

其次是半胱氨酸和—SH基，Malinowski和Fridovich用對(duì)－氯汞苯磺酸修飾半胱氨酸—SH基后，發(fā)現(xiàn)牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD、麥胚Cu，Zn－SOD和豬血紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD并不喪失活性，對(duì)雞肝Cu，Zn－SOD的修飾也得到同樣的結(jié)果。順丁烯二酰亞胺氮氧自由基旋標(biāo)（Maleimido）可以特異性地與蛋白質(zhì)分子中半胱氨酸的巰基結(jié)合，并根據(jù)巰基所處不同環(huán)境給出特征性的ESR波譜，對(duì)牛紅細(xì)胞Cu，Zn－SOD的游離巰基進(jìn)行自旋標(biāo)記，只能給出弱固定化的ESR信號(hào)，表明該巰基并不是包埋在蛋白質(zhì)分子疏水內(nèi)部而是位于比較接近溶劑的表層中，標(biāo)記后的酶仍然有酶活性，其紫外圖譜也未發(fā)生大的變化，表明巰基與酶的活性無(wú)直接聯(lián)系。

的氧化速率的限制階段是它在活性腔內(nèi)的擴(kuò)散，在腔內(nèi)的擴(kuò)散速率要比在水中高。靠近Cu^2＋，直到達(dá)到不發(fā)生化學(xué)鍵的生成就可以發(fā)生電子傳遞的距離。這種機(jī)制還不是很清楚。銅離子沒(méi)有被水分子結(jié)合是很重要的，這樣銅離子可以很容易地移動(dòng)到，這個(gè)幾何結(jié)構(gòu)使得靠近過(guò)程更容易發(fā)生。還原型的催化中心有著和氧化型的催化中心相同的帶電區(qū)域，的擴(kuò)散速率也是相同的。實(shí)際上的最初反應(yīng)，包括氧化型和還原型的酶以及低濃度的，同時(shí)氧化型酶和還原型酶有著相同的反應(yīng)速率。當(dāng)靠近還原型的酶時(shí)，它和His63的N₂的質(zhì)子鍵合，一旦Cu（Ⅱ）形成，它和His63結(jié)合。質(zhì)子從His63的N到之間傳遞，使得Cu（Ⅱ）和His63的N之間的鍵的重新形成產(chǎn)生了障礙。當(dāng)處于高濃度時(shí)，限制階段是質(zhì)子的傳遞速率，這個(gè)已經(jīng)用同位素標(biāo)記法H/D對(duì)活性速率的影響所證明。一個(gè)完全的反應(yīng)的所有階段都包括質(zhì)子梯度這樣一個(gè)限制過(guò)程，和其他的擴(kuò)散一樣控制著反應(yīng)過(guò)程。當(dāng)靠近Cu（Ⅰ）時(shí)，碰到了His63的質(zhì)子，然后發(fā)生電子傳遞過(guò)程。水分子中釋放出一個(gè)質(zhì)子，同時(shí)生成的Cu（Ⅱ）和H，H₂O₂釋放而不再與Cu（Ⅱ）結(jié)合，就像水分子一樣，這在Cu，Zn－SOD的X射線結(jié)構(gòu)中也可以觀察到。